| .条纹斑竹鲨鱼肝再生差异表达新基因NT7.1的原核表达及产物活性分析[J].中国海洋药物,2009,28(1):1-6-. |
| 条纹斑竹鲨鱼肝再生差异表达新基因NT7.1的原核表达及产物活性分析 |
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| 中文关键词: 条纹斑竹鲨鱼 差异表达序列 重组表达 抗肿瘤活性 |
| English Keywords: |
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| 中文摘要: |
| 目的NT7.1是一种鲨鱼肝脏再生过程中表达下调的功能基因片断,编码一个由134个氨基酸残基组成的假设蛋白。本研究的目的在于获得其重组蛋白,并检测该重组蛋白对肿瘤细胞增殖的作用。方法利用T4DNA连接酶将该编码序列连接到pET-28a载体中,通过CaCl2法转化到E.coli BL21中获得表达该基因的工程菌;工程菌经IPTG诱导表达,获得的包涵体蛋白经金属螯合亲和层析方法纯化和复性;进一步通过MTT法检测纯化后的重组蛋白对人胃腺癌细胞株BGC-823、急性粒细胞白血病细胞株HL-60、人肺腺癌细胞株A549和肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响。结果构建的基因工程菌株经1mmol·L-1的IPTG诱导6h后,可表达一大小约为18kDa的蛋白,表达量约占菌体总可溶性蛋白的40%。纯化后的重组NT7.1体外对4种肿瘤细胞的增殖均具有明显的抑制作用,其对BGC-823、HL-60、A549和SMMC-7721的IC50分别为2.66、0.44、2.96和4.99 nmol·L-1。结论NT7.1的原核重组表达产物对肿瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用。 |
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